医疗器械初始污染菌检验规程
一、目的
2025上海医疗器械创新展Medtec指出，建立医疗器械初始污染菌检验标准操作规程，确保检验结果的准确性和可靠性，为产品质量控制提供依据。
二、范围
适用于本公司生产的各类医疗器械产品在灭菌处理前的初始污染菌检测。
三、职责
1. 微生物检验员：负责按照本规程进行初始污染菌检验操作，并如实记录检验数据。
2. 微生物实验室主管：负责监督检验过程，审核检验结果，确保检验操作符合规程要求。
四、检验依据
参考《GB 15979 – 2002 一次性使用卫生用品卫生标准》、《ISO 11737 – 1:2018 医疗器械的灭菌 微生物学方法 第 1 部分：产品微生物总数的估计》等相关标准制定本检验规程。
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五、检验环境与设备
1. 检验环境：检验应在不低于 D 级背景下的局部百级洁净实验室进行，确保环境微生物对检验结果的影响最小化。
2. 设备与仪器
– 恒温培养箱（可精确控制在 30 – 35℃和 36℃±1℃）。
– 恒温水浴箱（能稳定在 44.5℃±0.2℃）。
– 漩涡混合器。
– 拍击式均质器。
– 电子天平（精度 0.1g）。
– 菌落计数器。
– 灭菌器（用于培养基、器具等的灭菌）。
– 无菌镊子、剪刀、采样棉签、培养皿、锥形瓶、试管等。
3. 培养基与试剂
– 胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）。
– 沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。
– 0.9%无菌氯化钠溶液。
六、抽样
1. 抽样数量：根据产品批量大小，按照相关标准或验证确定的抽样方案进行抽样。一般不少于 5 件最小销售包装产品。
2. 抽样方法：采用随机抽样原则，从成品库中抽取待检产品。2025上海医疗器械创新展Medtec指出，抽样过程应避免污染，使用无菌器具从产品的不同部位采集样品，对于有腔道的器械，应使用无菌注射器抽取内部冲洗液作为样品。
七、检验步骤
1. 样品制备：
– 固体样品：在无菌条件下，将样品剪碎至约 5mm×5mm 的小块，称取 10g 样品置于装有 90ml 0.9%无菌氯化钠溶液的锥形瓶中。将锥形瓶置于漩涡混合器上，以中等速度振荡 1 – 2 分钟，使样品充分混匀，得到 1:10 的供试液。如有必要，可进一步进行 10 倍系列稀释，具体稀释方法为：取 1ml 上一稀释度的供试液置于 9ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，充分混匀，以此类推。
– 液体样品：直接吸取 10ml 样品加入到 90ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，在漩涡混合器上混匀，制成 1:10 供试液，再根据需要进行稀释，稀释操作同固体样品。
2. 接种与培养：
– 细菌计数：取 1ml 供试液，使用无菌涂布棒均匀涂布于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，每个稀释度接种两个平板，每平板接种量为 0.5ml。涂布时，从平板的一侧开始，缓慢均匀地将供试液涂布开，避免划破培养基表面。将平板倒置，置于 36℃±1℃培养箱中培养 48h±2h。
– 真菌计数：取 1ml 供试液，使用无菌涂布棒均匀涂布于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，操作同细菌计数，置于 30 – 35℃培养箱中培养 72h±2h。
3. 菌落计数与结果报告：
– 培养结束后，使用菌落计数器对平板上的菌落进行计数。计数时，应选择菌落分布均匀、数量适中的平板进行计数，一般以 30 – 300 个菌落的平板为宜。细菌菌落数和真菌菌落数分别计算两个平板的平均值，乘以相应的稀释倍数，即为每克（或每毫升）样品中的初始污染菌数，单位以 CFU/g（CFU/ml）表示。例如，某样品在 1:100 稀释度的平板上，细菌菌落数平均为 50 个，则该样品的细菌初始污染菌数为 50×100 = 5000CFU/g（或 CFU/ml）。
– 如果平板上的菌落生长过于密集，无法准确计数，应报告为“菌落蔓延，无法计数”，并记录稀释倍数和具体情况。
八、质量控制
1. 定期对培养基进行适用性检查，确保培养基能够支持微生物的生长。具体方法为：将标准菌株接种于待检培养基平板上，在相应的培养条件下培养，观察菌株的生长情况，应与预期结果一致。
2. 每次检验时，设置阴性对照（仅接种培养基，不接种样品）和阳性对照（接种已知数量的标准菌株），以验证检验过程的有效性。阴性对照平板应无微生物生长，阳性对照平板上的菌落数应在规定范围内。
3. 检验人员应经过专业培训，具备微生物检验技能和无菌操作意识，定期进行技能考核。
九、检验记录与报告
1. 检验员应详细记录抽样信息、样品制备过程、接种培养条件、菌落计数结果等检验数据。记录应清晰、准确、完整，不得涂改。
2. 检验报告应包括产品名称、规格型号、批次、抽样数量、检验依据、检验结果、检验日期、检验员签名等内容。报告应由微生物实验室主管审核签字后生效。
十、注意事项
1.2025上海医疗器械创新展Medtec指出， 所有检验操作应在无菌条件下进行，严格遵守无菌操作规程，防止交叉污染。检验人员在操作前应穿戴好无菌工作服、口罩、帽子和手套等。
2. 检验过程中如发现异常情况（如培养基污染、设备故障等），应立即停止检验，分析原因，并采取相应的纠正措施。
3. 对检验后的样品和废弃物应进行灭菌处理，防止微生物扩散。可采用高压蒸汽灭菌法，在 121℃下灭菌 20 – 30 分钟。
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